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囊胚注射實驗
簡要描述：
囊胚注射實驗是一種將外源細胞（如胚胎干細胞或基因編輯后的細胞）注入早期胚胎（囊胚期）的技術，用于制備嵌合體或轉基因動物模型。注射的細胞可參與胚胎發(fā)育，形成嵌合體個體，其中部分組織或器官由外源細胞構成。該技術廣泛應用于基因功能研究、疾病模型建立及再生醫(yī)學領域，是研究細胞分化、發(fā)育生物學和基因編輯的重要工具。
更新時間：2025-07-25
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廠商性質：其他
一、囊胚注射實驗技術定義與核心原理
囊胚注射是將基因修飾后的胚胎干細胞（ES細胞）注入囊胚期胚胎（發(fā)育約3.5天的小鼠胚胎），通過嵌合體培育獲得基因修飾動物模型的技術。其核心機制包括：
嵌合體形成：外源ES細胞與宿主囊胚內(nèi)細胞團（ICM）融合，共同發(fā)育為嵌合體后代。
生殖系傳遞：ES細胞分化為生殖細胞，實現(xiàn)基因修飾的遺傳（需嵌合率＞60%）。
時空窗口：囊胚期胚胎細胞分化程度低，且囊腔結構便于顯微操作。
生物學基礎：
囊胚由外層滋養(yǎng)層細胞（發(fā)育為胎盤）和內(nèi)細胞團（發(fā)育為胎兒）構成，注射靶向ICM區(qū)域確保ES細胞參與胚胎發(fā)育。
二、囊胚注射實驗標準化操作流程
（一）前期準備
| 步驟 | 關鍵操作與參數(shù) |
|---|---|
| ES細胞制備 | 需多能性驗證（如Oct4表達），常用129品系或C57BL/6遺傳背景ES細胞 |
| 囊胚供體鼠處理 | 超排卵：PMSG（5IU）→ hCG（5IU）→ 與雄鼠合籠 → 取見栓后2.5天的囊胚（8細胞期胚胎培養(yǎng)過夜獲得） |
| 顯微注射系統(tǒng)校準 | 注射針內(nèi)徑10-15μm，單次注入10-15個ES細胞 |
（二）注射與胚胎移植
存活率控制：注射后囊胚存活率需＞90%，移植胚胎數(shù)≥10枚/受體鼠。
嵌合體鑒定：
毛色嵌合：ES細胞（如129-agouti）與宿主囊胚（如C57BL/6黑色）毛色差異直觀判斷嵌合率。
基因型驗證：PCR檢測外源基因或熒光標記（如GFP）。
（三）遺傳系建立
高嵌合體篩選：選擇毛色嵌合＞70%的雄性嵌合鼠。
生殖系傳遞：嵌合鼠與野生型交配 → F1代基因型檢測 → 建立純合品系。
